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猫弓形虫PCR检测试剂盒说明书

产品时间:2019-05-15

简要描述:

猫弓形虫PCR检测试剂盒说明书中含有聚合酶链式反应所需要各种试剂组分,如:引物、dNTPs、缓冲液、Taq酶等,PCR反应液混合液中加入检测样品,即可进行PCR扩增反应。PCR扩增产物经琼脂糖电泳染色判断,阳性样本将在相应大小的片段处出现特异性条带。

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产品名称:猫弓形虫PCR检测试剂盒说明书
规格:50T
编号:BH-P4376
分类:PCR检测试剂盒
储存条件:-20避光保存,避免反复冻融。
运输:低温、避光,快递免费送货上门。

规格及成分:
产品名称成 十孔盒包装
MMLV 逆转录酶-RI 混合液 101105A 20 μL
MMLV Buffer-dNTP
混合液 101105B 60 μL
微量核酸沉淀剂 50903 400 μL
TdT
(末端转移酶) 120312 10 μL
2×TdT Buffer
(含 dATP 101105 200 μL
PCR MagicMix 3.0
(含染料) 90805B 1mL×2
5′-RACE
引物 A-引物 B 混合液 yw373374 200 μL
5′-RACE
引物 C yw375 200 μL
RNase-Free
80403 1 mL
使用手册 101105sc 1
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 6 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 65432 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水(用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
数据采集:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合DNA 时,最大吸收光谱在 471nm,结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500nm,最大发射光谱在 530nm
数据处理:
鹦鹉热衣原体PCR试剂盒品牌以 Cps 阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品浓度的 log 为横轴,以 Ct 值为纵轴,通过待测样品的 Ct 值计算出样品 DNA 的浓度。
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注意事项:
加入试剂的顺序应*,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。
按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物AB液时,避免使用带金属部分的加样器
实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

 

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